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              簡述RNA提取試劑盒的正確操作步驟

              發布時間: 2022-09-01  點擊次數: 40次
                RNA提取試劑盒采用裂解液,只需將樣品與裂解液A和B混合,經一步掛柱和洗脫即可快速可靠從組織、細胞、抗凝全血、病毒液樣本中純化出高純度的總RNA。
               
                下面咱們來聊一聊RNA提取試劑盒的操作步驟:
               
                1、樣品處理
               
               ?。?)植物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
               
               ?。?)動物組織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
               
               ?。?)貼壁細胞:直接在培養板中加入裂解液裂解細胞,每106細胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。
               
               ?。?)細胞懸液:離心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
               
               ?。?)血液處理:取0.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘,10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細胞,可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。
               
                2、將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復合物完全分離。向勻漿樣品中加0.2ml氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。
               
                3、2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉移到新管中,不要吸到沉淀。
               
                4、吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室溫放置2分鐘,2-812,000rpm℃離心2min,棄廢液。
               
                5、第3步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-812000rpm℃離心2min,棄廢液。
               
                6、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),2-812,000rpm℃離心2min,棄廢液。
               
                7、向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-812,000rpm℃離心2min,棄廢液。
               
                8、12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
               
                9、將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min
               
                10、即得到RNA。

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